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Bio-techne|无血清培养神经hjc和干hjc,怎么给培养基「加点料」?

血清,「蜜糖」亦或是 「砒霜」?它既提供hjc生长的必备营养,也会因其复杂的成分和存在病原体污染的可能性而导致hjc死亡。

因而,在神经hjc和干hjc培养中,无血清体外培养日益成为主流。此时,应该如何选择无血清培养基补充剂呢?

首先,一分钟了解无血清培养基补充剂的变迁史:

1993 年 G. J. Brewer 等研究者开发了 B27‐supplemented neurobasal™成分明确的补充剂,该补充剂在已有的无血清培养基基础上,优化了 20 种成分的浓度,从而延长大鼠胚胎海马神经元的存活时间,后续被广泛使用。

由于商品化的培养基补充剂在培养神经元的能力上表现出很大的差异,2008 年 Yucui Chen 等人用 21 种不同的成分(NS21)重新优化和修改了 B27 的配方,以更好地支持神经元的培养,维持神经元的形态特征、突触的形成和突触后反应。同时,研究中发现 B27/NS21 的质量受牛血清白蛋白质量的影响,NS21 使用 holo-transferrin 比使用 apo-transferrin 效果更好。

R&D Systems® 的 N21-MAX 培养基补充剂(N21-MAX Media Supplement,货号 AR008)在传统的 B27 和 NS21 神经hjc培养基补充剂的基础上进行了改进,不含血清且成分明确,保证神经hjc的健康生长,促进神经突延伸和突触成熟。

在 E18 大鼠海马神经元无血清培养基中添加 N21-MAX Media Supplement(货号 AR008 ),显示突触标记物 Synaptotagmin(hjc货号 MAB4364 )和 CAM Kinase II(hjc货号 MAB5584 )的稳定表达。

如今,越来越多的 B27 相似补充剂面世,用于优化干hjc和 3D hjc培养,而 N21-MAX 在调控干hjc扩增,促进干hjc分化等方面也表现出色。每批 N21-MAX 都在原代海马神经元上进行测试,以确保品质的稳定性。

R&D Systems® 提供多款无血清培养基补充剂,主要产品及应用请参考:

除此之外,N-2 MAX Media Supplement 和 N21-MAX Media Supplement 也可作为多种类器官实验的培养基补充剂。针对不同的类器官培养,在官网有配套的实验流程及配方可供参考(https://www.rndsystems.com/cn/products/organoid-and-3d-culture-reagents),如人胃类器官培养等:

下面我们通过 5 个小问答,来进一步解答有关培养基补充剂的疑问:

1. 为什么要使用成分明确的培养基培养神经元 ?

无血清且成分明确的培养基通常被用作含血清的标准培养基的替代品,以减少研究人员不希望看到的实验波动。不可控的实验波动通常与培养基中添加的血清所含的成分有关,如维生素、激素和生长因子水平的不确定性。

当使用成分明确的培养基时,这些变动因素随之消除,病原体污染的可能性也会降低。此外,无血清培养基便于研究人员为特定实验设计开发特定用途的培养基。

2. N21-MAX Media Supplement (货号AR008) 与其它神经干hjc补充剂相比,优势在哪里?

我们实验室内部进行了对比测试,发现在长期培养(21 天)E18 大鼠海马神经元时,使用 AR008 可观察到更好的突触相关蛋白表达,增大突触内 puncta 的密度,促进突起生长(下图)。这主要是因为 N21-MAX 培养基补充剂含有 holo-transferrin,而其他补充剂通常含有 apo-transferrin。文献报道 holo-transferrin 是神经hjc培养的首选。

3. N-2 Plus Media Supplement (货号AR003) 和N-2 MAX Media Supplement (货号 AR009)的区别是什么?

AR003 和 AR009 均可用于培养神经元、神经祖hjc和干hjc,它们的主要区别在于胰岛素的来源。AR003 含有天然牛胰岛素,而 AR009 含有重组人胰岛素,其它成分完全相同。两款产品经过平行实验验证。

4. 除了人 Transferrin 外,N-2 MAX 培养基补充剂是否含有其它动物源成分 ?

不。除人转铁蛋白外,N-2 MAX 培养基补充剂不含任何动物源成分。GMP N-2 MAX 培养基补充剂(货号 AR016)是一种无动物源成分的添加剂。

5. N-2 MAX Media Supplement 和 N-2 Plus Media Supplement 是否可以解冻,分装,再冷冻,用于更小批次的基础培养基 ?

是的,这不会影响补充剂的稳定性。有限的冻融,分装成小包装使用,是可以接受的。

 

以上文字和图片来源于Bio-techne


 


 

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